2型神经元蜡样脂褐质沉积症PGD助孕治疗
病史
女方，28岁；男方，34岁 。2-0-0-0。第二个孩子（男孩）于3岁起开始出现癫痫，药物难以控制，继而出现运动、认知功能退化，视力损害直至失明。患儿在外院通过TPP1酶活性检测确诊为神经元蜡样脂褐质沉积症2型（NCL-2），精诚代怀孕基因检测发现患儿TPP1基因存在c.824 C>T杂合致病突变，其母携带有相同突变，父源致病突变不明。2011年夫妇前来生育咨询。女方既往无特殊病史，平素月经规则，周期28-30天，持续3-4天，量中，无痛经及性交痛。患儿有一胞姐有类似表型，6岁时夭折。
临床印象
NCL-2遗传病生育风险
治疗或建议
1.遗传咨询
精诚代怀孕告知NCL-2为常染色体隐性遗传性疾病，其致病基因为TPP1，曾生育过此类患儿的夫妇一般各自携带一个TPP1缺陷基因，再生育此类患儿的风险为1/4。
建议可供选择的生育方案：
①自然妊娠后，于孕18周抽羊水行产前基因诊断；
②胚胎植入前遗传学诊断（PGD）助孕。
经过充分知情同意，咨询各方案的利弊后，夫妇选择PGD助孕。
2.PGD
准备：
①设计母源突变位点微测序引物，及选择TPP1连锁微卫星标记位点，并设计引物。
②预检测引物的有效性和分析微卫星位点的多态性，确定遗传单体型，验证母源点突变。
③夫妇双方常规IVF术前准备。
治疗经过：选择常规长方案行超促排卵，共获卵7枚，6枚成熟卵，行ICSI后5枚正常受精，培养72小时后共5枚达到活检标准，每枚胚胎活检一个卵裂球，经单细胞全基因组扩增后，行分子遗传检测，确定TPP1基因型，选择一枚不携带母源致病突变的未受累胚胎植入，2周后抽血检测β-HCG＞1000 IU/L，孕5周B超提示宫内单胎妊娠。
图1：母源突变位点c.824 C>T测序图(左侧为Sanger测序结果，右图为微测序结果图)
图2：家系连锁分析
产前诊断
孕妇孕4月抽取羊水行TPP1单体型连锁分析及母源致病突变检测，提示患儿TPP1基因型与先证者不同，为未受累胎儿。
随访
孕30+5周因“前置胎盘”行剖宫产，分娩一女，出生体重1600克。目前4岁，生长发育一切正常。
点评
1、NCL-2为常染色体隐性遗传性疾病，夫妇曾生育过两个NCL-2患儿，临床诊断明确，再生育风险为1/4。夫妇应该各携带一个TPP1基因致病突变，但是本例夫妇，女方致病突变明确，男方未检出致病突变。可能原因为男方致病突变位于TPP1基因的调控区或者内含子深部。精诚代怀孕本例通过单细胞全基因组扩增后，在检测母源致病突变的同时，利用微卫星位点进行连锁分析TPP1基因单体型，选择一枚不携带已知母源致病突变的胚胎植入。是国际上首报的NCL-2的PGD案例。
2、该案例单基因疾病PGD是采用传统的方法选择STR连锁位点PCR法检测，程序复杂，对于有效STR位点的选择和验证，是一项耗时耗力的工作。而近年采用新的一代测序技术可以同时进行致病位点连锁的数十个SNP位点分析，大大减少了准备工作量，同时诊断准确性也明显提高，是单基因PGD非常有效的新利器。
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